home *** CD-ROM | disk | FTP | other *** search
/ The Arsenal Files 6 / The Arsenal Files 6 (Arsenal Computer).ISO / health / med9603.zip / M9630433.TXT < prev    next >
Text File  |  1996-02-27  |  3KB  |  48 lines
  1.        Document 0433
  2.  DOCN  M9630433
  3.  TI    Flow cytometric immunodetection of human immunodeficiency virus type 1
  4.        proviral DNA by heminested PCR and digoxigenin-labeled probes.
  5.  DT    9603
  6.  AU    Yang G; Garhwal S; Olson JC; Vyas GN; Department of Laboratory Medicine,
  7.        University of California, San; Francisco 94143-0134, USA.
  8.  SO    Clin Diagn Lab Immunol. 1994 Jan;1(1):26-31. Unique Identifier :
  9.        AIDSLINE MED/96050774
  10.  AB    PCR is the most sensitive and direct method for detecting blood-borne
  11.        viruses, as well as an efficient means for producing vector-free probes.
  12.        However, the application of PCR, especially in the laboratory diagnosis
  13.        of human immunodeficiency virus (HIV) infection, is impeded by the
  14.        current use of radiolabeled oligonucleotide probes. Therefore, we have
  15.        developed a nonisotopic PCR immunoreactive bead (PCR-IRB) assay to
  16.        detect HIV type 1 proviral DNA from peripheral blood mononuclear cells
  17.        (PBMC). We used a biotinylated primer in a set of three oligonucleotides
  18.        selected from the HIV long terminal repeat region for heminested PCR
  19.        amplification. An internal probe was synthesized by PCR with
  20.        incorporation of digoxigenin-labeled dUTP. After solution hybridization
  21.        of the probe with PCR-amplified products (amplicons), the hybridized DNA
  22.        was captured with streptavidin-coated magnetic beads. For the detection
  23.        of hybrids, flow cytometric analyses were carried out by two procedures:
  24.        (i) direct detection with fluorescein isothiocyanate (FITC)-labeled
  25.        antidigoxigenin immunoglobulin G (IgG) antibody and (ii) indirect
  26.        detection with antidigoxigenin sheep IgG antibody followed by
  27.        FITC-labeled anti-sheep IgG antibody. Both procedures in the PCR-IRB
  28.        assay detected two to three copies of HIV proviral DNA sequences, a
  29.        sensitivity that is comparable with that of the conventional radioactive
  30.        detection of amplicons following probe hybridization and
  31.        electrophoresis. To compare the PCR-IRB assay with the conventional
  32.        method, we tested 53 pedigreed PBMC specimens from blood donors and
  33.        newborns; the results obtained were identical. This nonisotopic PCR-IRB
  34.        assay can also be automated for potential application in laboratory
  35.        diagnosis of HIV infection, blood bank screening, and therapeutic
  36.        monitoring of viremia and perinatal transmission.
  37.  DE    Base Sequence  Comparative Study  Digoxigenin  DNA Primers  *DNA Probes
  38.        DNA, Viral/*ISOLATION & PURIF  Female  *Flow Cytometry  Human
  39.        HIV-1/*GENETICS/ISOLATION & PURIF  Immunomagnetic Separation  Infant,
  40.        Newborn  Leukocytes, Mononuclear/VIROLOGY  Microspheres  Molecular
  41.        Sequence Data  Polymerase Chain Reaction/*METHODS
  42.        Proviruses/*GENETICS/ISOLATION & PURIF  Support, U.S. Gov't, P.H.S.
  43.        JOURNAL ARTICLE
  44.  
  45.        SOURCE: National Library of Medicine.  NOTICE: This material may be
  46.        protected by Copyright Law (Title 17, U.S.Code).
  47.  
  48.